产品目录

本试剂盒通过FPCB Solution裂解释放出基因组DNA，采用特殊的吸附膜，有选择性地吸附核酸分子，去除其他杂质，经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质，最后用Elution Buffer、TE或者水洗脱，得到高质量的基因组DNA。本试剂盒所得到的DNA可直接用于酶切、连接、PCR等后续的分子生物学试验。

• 适用范围广，几乎适用于所有真菌基因组DNA的抽提。
  
• 操作简单快速，整个提取过程在1小时左右完成。
  
• DNA纯度好，得率高。

• 自备试剂：无水乙醇、异丙醇、氯仿、β-巯基乙醇、RNase A（20mg/mL）等。
  
• 使用前请检查FPCB Solution和BD Buffer，如有沉淀，请于55℃溶解沉淀，待冷却至室温后使用。
  
• 按瓶身标签说明在Wash Solution中加入3倍体积的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。若Wash Solution由于运输或保管不当造成容量不准，请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。
  
• PW Solution使用前加入12mL的异丙醇。
  
• 提前将水浴锅调至65℃备用。

• 取50～100mg新鲜真菌或20mg干燥子实体或菌丝，液氮中充分研磨成粉末。依次加入700μL 65℃预热的FPCB Solution和7μL β-巯基乙醇，充分混匀，65℃温浴25min，间或混匀。
  
  • 研磨是否充分会严重影响基因组的得率。研磨良好的标准是在加入FPCB Solution后，在溶液中没有大的团块。
    
  • 所取真菌样品的用量不要超过规定量。
    
  • 根据裂解情况可适当延长裂解时间。
• 12000rpm离心10min，将上清转移至干净的1.5mL离心管中，加入700μL氯仿，充分混匀，12000rpm离心5min。
  
  • 如果提取样品含有多酚或多糖，可以在加入氯仿前用酚:氯仿（1:1,pH8.0）等体积充分混匀，12000rpm离心5分钟，取上清，反复抽提1～3次。
• 吸取上清至一干净的1.5mL离心管中，加入40μL RNase A（20mg/mL），充分混匀，室温放置10min。
  
  • 不要吸取到中间层变性蛋白质部分。
• 依次加入1/2体积BD Buffer和1/2体积无水乙醇(如500μL上清液需加入250μL BD Buffer和250μL无水乙醇)，充分混匀。
  
  • 加入BD Buffer后，可能产生白色沉淀，70℃水浴10分钟沉淀会消失，如果溶液仍没有澄清，说明裂解不彻底，会降低基因组DNA的得率和纯度。
    
  • 溶液和乙醇须充分混匀，否则会影响DNA得率。
    
  • 加入无水乙醇后，可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响提取和应用。
• 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加至吸附柱中，静置2min，10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
• 将吸附柱放回收集管中，加入500μL PW Solution，10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • PW Solution使用前请检查是否按比例加入异丙醇。
• 将吸附柱放回收集管中，加入500μL Wash Solution，10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • Wash Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
• 将吸附柱放回收集管中，10000rpm离心2min。
  
  • 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
• 将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入50μL预热（60℃）的Elution Buffer，静置5min，10000rpm离心1min，将所得到的DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。
  
  • Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl，pH8.5，可以用TE或水（pH>7.0）代替。
    
  • 将Elution Buffer预热至60℃可以进一步提高得率。
    
  • 请勿使用小于40μL的洗脱液进行洗脱。